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近期，北大医学部基础医学院病原生物学系鲁凤民教授团队在慢性乙型肝炎（慢乙肝）患者血清乙型肝炎病毒（HBV）RNA产生机制和临床意义研究方面取得重要进展。相关研究成果相继发表于国际肝病学领域代表性期刊Journal of Hepatology（J Heptol. 2016、2017），申请国家发明专利2项，并研制成功国内首个血清HBV RNA荧光定量（TaqMan探针法）检测试剂。该团队王杰讲师为本研究的主要完成人。
慢性HBV感染是我国最为严重的传染性疾病。目前，我国有近8000万慢性HBV感染者、近2000万慢乙肝患者。慢乙肝难以治愈和停药后病毒学反弹的主要原因是存在于感染肝细胞核内的病毒复制模板-HBV共价闭合环状DNA（cccDNA）难以清除。因此，肝组织内HBV cccDNA的清除被认为是慢乙肝患者最接近完全治愈的标志。但由于HBVcccDNA检测需要进行肝组织活检，限制了其在临床上的应用。
目前，临床上多以乙肝表面抗原（HBsAg）消失作为评价慢乙肝“临床治愈”和停药的标准，但现有药物和治疗手段很少能使慢乙肝患者血清HBsAg阴转。为减少停药带来的病毒学反弹和疾病复发，各国慢乙肝防治指南多强调患者需要长期甚至终生用药，而实际上约20%的患者停药后并不会反弹。因此，临床上仍缺乏甄别和确定慢乙肝患者安全停药的可靠指标。
鲁凤民教授团队首先证实血清HBV RNA为包裹在病毒样颗粒内的未经或部分逆转录的前基因组RNA（pgRNA），改变了过去认为pgRNA只有逆转录形成DNA后才能释放子代病毒的看法。该团队进一步研究发现，相对于其它病毒学指标，血清HBVRNA在核苷（酸）类药物治疗的背景下可以更好地反映肝细胞内cccDNA活性，小样本临床研究证实停药时血清HBV RNA水平可预测停药后病毒反弹的情况。
在此基础上，鲁凤民教授提出了以血清HBVRNA持续消失为实验室诊断指标的“准临床治愈”和“安全停药”概念，并首次提出在血清HBVRNA检测指导下的慢乙肝临床治愈路线图。该团队与北京热景生物技术股份有限公司合作，成功研制了国内首个血清HBVRNA荧光定量（TaqMan探针法）检测试剂，并于近日获得产品注册检验报告。这意味着血清HBV RNA作为乙肝抗病毒治疗监测新靶点，将进入临床试验阶段。
以血清HBV RNA持续消失作为一种新的“准临床治愈”标准，不仅可以让更多接受核苷（酸）类药物治疗的慢乙肝患者安全停药，不再受终生用药之苦，慢乙肝“治愈”率的提高也将对未来抗病毒治疗临床实践产生重要影响。
该研究得到国家“艾滋病和病毒性肝炎等重大传染病防治”重大科技专项和国家自然科学基金的支持。相关研究成果获健康报、人民日报海外版、北京日报、北京青年报，以及中国科技网、中华医学网、人民网等媒体广泛报道。鲁凤民教授团队未来将继续对血清HBV RNA的临床意义进行多中心大样本临床队列研究，明确“准临床治愈”和以其为基础的“安全停药”的可行性。
近期，欧洲肝脏病学会权威杂志Journal ofhepatology发表了北京大学医学部病原生物学系鲁凤民团队关于HBV pgRNA病毒样颗粒的实验确证及其临床意义的文章。
乙肝病毒（HBV）可以前基因组RNA（PregenomeRNA，pgRNA）颗粒存在。血清中的HBV pgRNA颗粒含量可能与抗乙肝药物停药后的反弹有关，本文研究结果显示HBVpgRNA颗粒含量检测值作为临床监测指标，可以正确评估核苷酸类抗病毒药物的停药时间。
Wang J, Shen T,Huang X, et al. J Hepatol 2016; 65: 700-710.
背景：最新研究结果显示，慢性乙型肝炎治疗的治疗效果，可能与血清中乙型肝炎病毒的RNA载量有关。本文研究探讨了血清中乙型肝炎病毒RNA的性质、起源、基础机理和潜在的临床指标意义。
方法：分别在以细胞培养上清（HepAD38细胞、感染HBV病毒的HepG2.2.15和原代人肝细胞）和血清样本（转基因小鼠和慢性乙肝患者）为研究对象，检测了HBV病毒的DNA和RNA载量。为了分离鉴别上述样本中的RNA含量，使用了NP-40和蛋白酶K处理，蔗糖密度梯度离心法，电子显微镜、Northern杂交、多重PCR以及5'Race 技术（5' rapid-amplification of cDNA ends）等检测手段。
结果：在慢性乙肝患者体内检测到了大量的乙型肝炎病毒RNA存在，尽管其RNA的含量明显低于乙型肝炎病毒DNA 的含量。系列的实验证实血清中的乙型肝炎病毒RNA以前基因组RNA的（pregenomeRNA，pgRNA）形式存在于病毒样颗粒中。在阻断了HBVDNA聚合酶逆转录活性以后，pgRNA的含量大幅度升高；在阻断pgRNA壳体化（Encapsidation of pgRNA）以后，pgRNA的含量则降低。值得注意的是，结果还显示，在慢性乙肝病毒的治疗中，乙型肝炎病毒pgRNA颗粒（HBV pgRNA virion）的含量，与核苷酸类药物停药后，患者体内病毒的含量反弹存在一定的关系。
结论：血清中乙型肝炎病毒的 RNA成分被证实以pgRNA病毒样颗粒的形式存在。乙型肝炎病毒前基因组RNA颗粒是由未完全转录而遗留的前基因组RNA所包装组成的病毒样颗粒。在临床上，HBV 前基因组RNA颗粒的检测结果，可以作为慢性乙肝治疗药物停药的一个潜在监控指标。精美研究结果展示
图1：多重PCR检测乙肝病毒RNA的原理图
图2：蔗糖密度梯度离心获得26组分呈现乙肝病毒样颗粒
图3：HBV RNA颗粒含量与NA类药物停止治疗后病毒反弹的关系
图4：乙肝病毒pgRNA颗粒产生和感染的基础假说
鲁教授团队最新又一篇Letter被接收：
Consistentloss of serum HBV RNA mightpredict the “para-functionalcure”of chronic hepatitis B
文章来源：科学网
图片来源：科学网
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