【正清学术】正清风痛宁对大鼠骨质疏松性椎体骨折的影响

正清风痛宁注射液的主要成分是盐酸青藤碱，是从中草药青风藤中提取的一种单体生物碱，具有消肿、抗炎、止痛等功效。前列腺素E2(PGE2)是重要的致痛物质，可引起的痛觉过敏，6-酮-前列腺素E1a(6- keto-PGE1a)是PGE2的前体，动物实验发现青藤碱可抑制6-keto-PGE1a合成，且N-甲基-D-天冬氨酸受体拮抗剂可抑制这种痛觉过敏现象，而N-甲基-D-天冬 氨酸受体兴奋与一氧化氮（NO)的活化密切相关。NO由神经元型一氧化氮合酶(nNOS)催化L-精氨酸后生成，是一种重要的炎症介质和扩血管物质，可介导感觉信号的传递，增加对致痛物质的PGE2敏感性，其合成增多会提高神经突触的兴奋性，增强对机体对痛觉反应的敏感性。八肽胆囊收缩素(CCK-8)具有拮抗阿片肽的镇痛作用，为目前已知的抗阿片肽作用最强的物质，脑脊液中CCK-8含量与痛觉相关。

青藤碱及其制剂正清风痛宁注射液的镇痛作用研究较多，但其对骨质疏松性椎体骨折引起的疼痛和骨量降低影响骨折愈合的研究却鲜有报导。本研究试图从大鼠骨质疏松性椎体骨折模型中致痛相关因子及青藤碱制剂正清风痛宁注射液对其影响来研究其作用机制。

正清风痛宁注射液(湖南正清制药集闭股份有限公司，国药准字:02372409Z);CCK-8、6-keto-PGEla、NO及nNOS检测ELISA试剂盒均购自上海蓝基生物科技有限公司。

1.2实验动物

SPF级健康雌性SD大鼠40只，鼠龄3个月，体质量（180-190)g，由湖北省实验动物研究中心提供。动物生产合格证号:SCXK(鄂)2017-0005。

取SD大鼠30只，参考文献大鼠麻醉前均禁水禁食6h，用10%水合氯醛(0.3 mL/100 g)腹腔注射麻醉， 麻醉成功后将其腹部朝上固定在手术台上。下腹部正中备皮，碘伏消毒，用手术刀切开下腹部正中皮肤、分离浅筋膜、深筋膜直达肌层，分离输卵管并沿输卵管寻找卵巢，然后用丝线结扎输卵管峡部，剪去双侧卵巢。然后分层缝合，最后再次碘伏消毒缝合皮肤。参考文献，标准词料词养2个月后再同次方法麻醉大鼠，腹部向下固定，相当于椎体L₃水平备皮，皮肤消毒。纵行 切开大鼠L₃椎体皮肤、暴露腹膜后间隙、分离背阔肌、背最长肌、棘间肌和韧带，暴露L₃椎间盘，从椎体侧前方剪断L₃椎体前缘，然后分层缝合。术后不做内固定，剪断的椎体断端骨小梁会因相互挤压、嵌插、扭曲而导致L₃椎体变短，在内就会因为自身重力和运动等因素的作用下压缩变短成模。

将上述手术造模的30只SD大鼠，采用随机数字表编号随机分随机分模型组、正清风痛宁0.5mg组和2mg组，每组10只。剰下的10只未手术的正常鼠设为假手术组，本组仅做皮肤消毒和备皮处理，不手术，作为对照。在建模术后4周起，在L₃脊柱两侧夹脊穴注 射正清风痛宁，0.5 mg组(0.5 mg)和2 mg组(2 mg)分别于L₃夹脊穴注射正清风痛宁注射液进行治疗，假手术 组和模型组给予等体积生理盐。以上各组每天注射治疗1次，共4周。实验动物12h交替光照并分笼词养，自由摄食、饮水及活动，动物房温度为25±2丈，湿度75%。

于成模后及治疗2周时分别取脑脊液，采用酶联免疫吸附(ELISA)法检测八肽胆囊收缩素(CCK-8)、 6-酮-前列腺素E1a(6-keto-PGE1a)、一氧化氮(NO) 及神经元型一氧化氮合酶(nNOS)含量，采用骨定量超 声诊断技术检测骨折腰椎骨定量振幅衰减(BUA)及骨密度(BMD)。

3.1 正清风痛宁对大鼠BUA及BMD的影响

假手术组成模后和治疗后BUA及BMD无明显变 化（尸>0.05)。模型组、正清风痛宁0.5 mg组和2mg 组成模后与假手术组比，差异有统计学意义（P< 0.05 ); 模型组治疗后BUA及BMD均明显降低，与假手术组 比，差异有统计学意义（尸< 0.05 ); 2mg组治疗后BUA及BMD均明显升高，与同组成模后和模型组比，差异有统计学意义（尸< 0.05 )。

3.2正清风痛宁对大鼠NO、nNOS、CCK-8和6-keto-PGE1a的影响

假手术组成模后和治疗后NO、NOS、CCK-8和6-keto-PGE1a含量比较差异无统计学意义（P> 0.05 )模型组、正清风痛宁0.5mg组和2mg组成模后与假手术组比，差异有统计学意义（P< 0.05 )。

3.3正清风痛宁对大鼠自发痛的影响

假手术组成模后和治疗后抬腿次数、抬腿持续时间及治疗4周后足缩足阈值均值比较差异无统计学意 义（P> 0.05)。模型组治疗后抬腿次数和抬腿持续时 间均增多和延长，治疗4周后足缩足阈值均值降低，与假手术组比，差异有统计学意义（P>0.05)。正清风痛宁0.5mg组和2mg组成模后与假手术组比，差异有统计学意义（P>0.05)_;2mg组治疗后与同组成模后和模型组比，差异有统计学意义（P>0.05)。

3.4正清风痛宁对大鼠MWT的影响

假手术组MWT在治疗期间无明显变化，前后比较差异无统计学意义（P> 0.05 )。模型组和正清风痛宁 0.5 mg组MWT随治疗时间延长逐步降低，与假手术组比，差异有统计学意义（P> 0.05);2 mg组MWT随治 疗时间延长逐步提高，治疗后与同组成模后和模型组比，差异有统计学意义（P> 0.05)。

综上所述，骨质疏松性椎体骨折会造成严重的疼痛，正清风痛宁注射中的青藤碱在穴位注射吸收后，对骨质疏松性椎体骨折疼痛产生肯定的治疗作用。正清风痛宁穴位注射可能是通过增加大鼠下丘脑nNOS分泌、抑制NO和6-keto-PGEla合成、降低CCK-8而产生中枢镇痛作用，这一作用可能成为治疗老年骨质疏 松性椎体骨折疼痛及促进骨折愈合的新靶点。