郞明洋 付长华
花园药业股份有限公司
浙江 金华 322121
摘要：目的：比较浙江省不同产地茶叶的主要成分含量差异。方法：采用高效液相色谱（HPLC）法测定不同产地茶叶中表儿茶素（EC）、表儿茶素没食子酸酯（ECG）、表没食子儿茶素没食子酸酯（EGCG）、没食子酸（GA）及咖啡因（Caf）的含量。色谱柱为AgilentSB-C18（5 μm，4.6mm×250 mm）；流速为1.0 mL/min；进样量为20μL；检测波长为280 nm；柱温为30 ℃；以乙腈-0.2%磷酸溶液（10:90）为流动相A、乙腈-0.2%磷酸溶液（80:20）为流动相B进行梯度洗脱。结果：不同产地茶叶中表儿茶素（EC）、表儿茶素没食子酸酯（ECG）、表没食子儿茶素没食子酸酯（EGCG）、没食子酸（GA）及咖啡因（Caf）的含量区间分别为0.57%～0.85%、0.13%～1.78%、0.51%～7.04%、0.15%～0.31%、1.63%～3.37%。结论：本实验结果可以为茶叶人工培育和GAP基地建设提供依据，同时为茶叶提取物制备提供药材筛选依据。
关键词：茶叶；主要成分；高效液相色谱；差异
Comparison and analysisof main components of tea from different producing areas in Zhejiang province
Lang Mingyang Fu Changhua
Huayuan Pharmaceutical LLC
Zhejiang Jinhua 322121）
Abstract：Objective: Comparison of the main components and theircontents in tea from different producing areas.Method: The contents ofepigallocatechin（EC），epigallocatechin gallate（ECG），epigallocatechin gallate（EGCG），gallic acid（GA）andcaffeine（Caf）in tea fromdifferent producing areas were determined by high performance liquidchromatography（HPLC）.Which wasperformed on an Agilent SB-C18column（5μm，4.6 mm×250 mm）throughgradient elution with acetonitrile 0.2% phosphoric acid solution（10:90，V/V）as mobile phase A，and acetonitrile and 0.2%phosphoric acid solution（80:20，V/V）as mobile phase B,at a flow rate of 1.0 mL/min and detected at 210nm. The column temperature was 30℃，and the injection volume was 20μL.Result: The results showed that，the contents of epigallocatechin（EC），epigallocatechin gallate（ECG），epigallocatechin gallate（EGCG），gallic acid（GA）and caffeine（Caf）ofdifferent producing areas were 0.57%～0.85%、0.13%～1.78%、0.51%～7.04%、0.15%～0.31%、1.63%～3.37%，respectively.Conclusion: This study can provide areference for not only artificial cultivation of tea and construction of GAPbase，but also the screening of medicinalmaterials tea extract preparation.
Keywords：Tea；Maincomponents；High performance liquid chromatography；Differences
0 引言
茶为山茶科植物茶（Camelliasinensikuntze）的芽叶，具有抗氧化、抗衰老、抗辐射、防治心血管疾病、防癌抗癌及调节免疫等多种功效[1]，被应用于食品、饲料、化妆品、医药等多个领域[2]。研究表明，从茶叶中提取的茶多酚在增强人体健康方面具有重要的作用。茶多酚因其独特的药理性质备受关注[3]，许多体内和体外研究都表明茶多酚在预防癌症，治疗慢性胃炎、神经退化和心血管疾病中具有重要作用[4]。
我国茶园种植面积居世界首位，茶资源丰富，利用碎末茶、中低档茶与夏秋茶提取茶多酚的工艺非常成熟[2]。本文对茶叶主产区浙江省多个产地的茶叶质量进行分析，以表儿茶素（EC）、表儿茶素没食子酸酯（ECG）、表没食子儿茶素没食子酸酯（EGCG）、没食子酸（GA）及咖啡因（Caf）的含量为指标进行考察研究，为企业选择生产原料提供依据。
随着茶多酚应用的开发，其分析方法也不断得到提高和完善，用于测定茶多酚含量的方法有光谱法、电化学法、滴定法、色谱法等[5]。非色谱法只能测定茶多酚总量，而色谱法具有专属性强、灵敏度高等优点，可以用于茶多酚单一成分的测定，其中常用的有高效液相色谱法、气相色谱法、质谱法等[6]。本研究采用高效液相色谱法进行茶多酚含量的测定。
1 材料与方法
1.1材料与试剂
茶叶样品（共收集14批不同产地的茶叶原料）：杭州市径山镇（编号1、2、3、4）、绍兴市新昌县（编号5、6、7）、金华市磐安县（编号8、9、10、11）、东阳市东白山（编号12、13、14）。
对照品：表儿茶素（EC）、表儿茶素没食子酸酯（ECG）、表没食子儿茶素没食子酸酯（EGCG）、没食子酸（GA）及咖啡因（Caf），购于中国食品药品检定研究院。
试剂：乙腈（色谱级），购于美国TEDIA公司；磷酸（色谱级）、甲酸（分析纯），购于阿拉丁生化科技有限公司；水（纯净水），购于杭州娃哈哈集团；氢氧化钙（分析纯），购于GENERAL-REAGENT。
1.2仪器与设备
Agilent 1260高效液相色谱仪，VWD检测器（安捷伦科技有限公司）；METTLER TOEDO ME204E（万分之一）、METTLER TOEDO XS105（十万分之一）分析天平（梅特勒股份有限公司）；恒温水浴锅（上海精宏实验设备有限公司）；超声清洗机（宁波新芝生物科技股份有限公司）。
1.3实验方法
1.3.1色谱条件[7]
色谱柱为Agilent SB-C18（5 μm，4.6 mm×250 mm）加保护柱；流速：1.0 mL/min；进样量：20 μL；检测波长：280 nm；柱温：30 ℃；流动相：乙腈-0.2%磷酸溶液（10:90）为流动相A，乙腈-0.2%磷酸溶液（80:20）为流动相B，按照0～10min时A为100%，10～30min时A从100%到90%，30～50min时A从90%到100%，50～60 min时A为100%进行梯度洗脱。
1.3.2对照品溶液的制备
取表儿茶素（EC）对照品、表儿茶素没食子酸酯（ECG）对照品、表没食子儿茶素没食子酸酯（EGCG）对照品、咖啡因（Caf）对照品和没食子酸（GA）对照品适量，精密称定，分别加25%甲醇制成每l mL含表儿茶素68μg、表儿茶素没食子酸酯0.14 mg、表没食子儿茶素没食子酸酯0.85 mg、咖啡因14μg、没食子酸20μg的溶液，即得。
1.3.3供试品溶液的制备[8]
将各批次样品粉碎成中粉，称取约2.0g，精密称定，置于1L烧杯中，加入新煮沸的纯净水400 mL，在95 ℃热水水浴锅中保温10 min，每隔30 s搅拌1次；温浸结束后冷却至室温，过滤到500 mL容量瓶中，并用少量纯净水洗涤烧杯和样品残渣2～3次，合并滤液；在量瓶中加入甲酸0.5 mL，再加水定容至刻度，摇匀；用0.45 μm微孔滤膜滤过，取续滤液，即得。
2 结果与分析
2.1线性范围考察
精密称取一定量对照品，加甲醇溶解，配置成一系列梯度浓度，按“1.3.1”项下色谱条件分析，得到茶叶相关对照品混标图谱，如图1所示。分别以各组分的浓度（μg/mL）为横坐标X，峰面积为纵坐标Y绘制标准曲线，得到5种组分的线性回归方程和相关系数，结果如表1所示。
从图1、表1可知，茶叶各组分在相应浓度范围内呈良好的线性关系。
2.2精密度实验
取对照品混标溶液，连续进样6次，每次20μL，分别得到表儿茶素（EC）、表儿茶素没食子酸酯（ECG）、表没食子儿茶素没食子酸酯（EGCG）、没食子酸（GA）及咖啡因（Caf）峰面积的RSD分别为1.14%、0.30%、0.22%、0.87%、0.46%，表明仪器精密度良好。
2.3稳定性实验
取新制备的杭州市径山镇1号茶叶样品溶液，每隔一段时间进样分析1次，进样量20μL。结果显示，在样品溶液制备好后的14h内，表儿茶素（EC）、表儿茶素没食子酸酯（ECG）、表没食子儿茶素没食子酸酯（EGCG）、没食子酸（GA）及咖啡因（Caf）峰面积的RSD分别为1.42%、0.69%、1.52%、0.74%、0.81%，供试品溶液在14 h内稳定，符合相关规定。
2.4重现性实验
取干燥的杭州市径山镇1号茶叶样品，按“1.3.3”项下方法平行制备5份样品，进样量20μL，依据所获得的峰面积求得各组分在茶叶样品中的含量。结果显示，在5份样品溶液中，表儿茶素（EC）、表儿茶素没食子酸酯（ECG）、表没食子儿茶素没食子酸酯（EGCG）、没食子酸（GA）及咖啡因（Caf）含量的RSD分别为1.77%、1.65%、1.82%、1.61%、0.97%，表明该方法重复性良好。
2.5加样回收率实验
取茶叶样品（杭州市径山镇1号，EGCG含量3.84%）适量，精密称取1.0g，称取6份，以样品EGCG含量:对照品EGCG含量=1:1加入对照品，按“1.3.3”项下方法处理样品，按“1.3.1”项下色谱条件检测。结果显示，EGCG的加样回收率分别为101.965%、97.911%、103.288%、102.075%、101.494%、102.982%，平均值为101.619%，RSD为1.90%，表明该方法回收率良好，符合相关规定。
2.6不同产地茶叶样品含量测定
每个产地随机选取多份样品，所有茶叶样品按“1.3.3”项下方法平行制备3份，用“1.3.1”项下色谱条件分析，进样量20μL（可根据具体含量情况进行调整）。将获得的各组分峰面积值代入“2.1”项下相应的回归方程中，求取各样品溶液的浓度，计算各组分在茶叶样品中的含量，结果如表2所示。图2～图6为不同产地茶叶中不同组分含量比较。
3 结语
本研究通过方法学验证，证明了该含量测定方法简便可行，样品制备方法简便，提取充分[7、9]，可用于茶叶原料中表儿茶素（EC）、表儿茶素没食子酸酯（ECG）、表没食子儿茶素没食子酸酯（EGCG）、没食子酸（GA）及咖啡因（Caf）的含量检测。研究结果表明：不同产地之间除没食子酸（GA）含量差别不显著外，其余含量存在显著差异。其中，茶叶中表没食子儿茶素没食子酸酯（EGCG）的含量与产地及加工密切相关，同一产区不同采收批次之间存在显著差异，不同产地茶叶中表儿茶素（EC）、表儿茶素没食子酸酯（ECG）、表没食子儿茶素没食子酸酯（EGCG）、没食子酸（GA）及咖啡因（Caf）的含量区间分别为0.57%～0.85%、0.13%～1.78%、0.51%～7.04%、0.15%～0.31%、1.63%～3.37%。
我国作为茶树栽培及茶叶加工的发源地，茶叶分布较广，茶叶大部分经加工后用于泡茶饮用，是一种世界性饮料[10]。我国出现了如绿茶、红茶、乌龙茶、特种茶等闻名世界的茶品。与此同时，茶叶也被深加工为茶叶提取物，用作药品和膳食补充剂的原料[11]。本研究通过对浙江省四个主要茶叶产地不同批次间的茶叶主要成分含量进行比较分析，以期为茶叶人工培育和GAP基地建设提供依据，同时为企业的茶叶提取物制备提供原料筛选方法。
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作者简介：
郞明洋（1977—），男，重庆人，执业中药师，从事新药研究与开发工作。
