HPLC色谱柱使用与维护过程中需注意事项
作者：唐美利
高效液相色谱（HPLC）是药物分析人员主要的分离分析手段，分离是核心，而担负分离作用的色谱柱是色谱系统的心脏。色谱柱的柱效越高、选择性越好，对我们的分析检测越有利。实验过程中若能规范色谱柱的使用与维护行为，不仅能保证检测数据准确可靠，也能延长色谱柱的使用寿命。
在色谱柱的使用与维护过程中，需要注意的主要有以下几个方面：
1.柱效测试
对于新购色谱柱按出厂报告做柱效测试，并将结果保存起来，作为今后评价柱性能变化的参考。
如有必要可定期对色谱柱进行柱效测试。
2.色谱柱使用记录（使用台账）
每根色谱柱入库时应分配编号，建立使用记录。
每次使用，如实登记使用情况（柱压，柱效，分离度等），以便进行日常维护。
3.色谱柱平衡
在拿到一根新的色谱柱时，应首先用0.2ml/min的流速将色谱柱平衡过夜（反相色谱柱可用甲醇或乙腈，正相色谱柱可用异丙醇），然后将流速升高到1.0ml/min冲洗30分钟，以便将色谱柱的填料充分平衡至最佳状态，这样可以保证色谱柱的使用寿命，并且保证在以后的使用中，获得分析结果的重现性。
平衡过程中，将流速缓慢地提高。
用流动相平衡色谱柱直到获得稳定的基线(若含缓冲盐，则用不超过50%有机溶剂的置换溶剂顶替掉原来的纯有机相)。
4.样品处理
对于辅料等不溶于稀释剂的样品，应通过离心或过滤除去微粒及杂质。
了解样品在流动相中的溶解度（如样品的溶剂不是流动相，一定要用流动相试溶解度，防止其在流动相中析出）。
了解样品与色谱柱的基质/填料是否相互作用。
5.流动相选择
尽量使用HPLC级溶剂配制流动相（合适的流动相可延长色谱柱的使用寿命，提高柱性能）。
流动相组分应对色谱柱填料无溶解性、腐蚀性。
流动相应对样品具有溶解性。
流动相的pH值应尽可能在规定范围之内（说明书对pH范围有规定）。
含缓冲盐的梯度洗脱，有机相最高比例时应保证缓冲盐不得有析出。
流动相使用前必须经脱气和过滤处理。
6.采用预柱或保护柱
预柱：置于泵和进样器之间，只通过流动相，起饱和流动相和过滤流动相的作用。
保护柱：置于进样器和分析柱之间，通过带有样品溶液的流动相，起过滤样品的作用。
7.色谱柱保存
对使用盐浓度较高的流动相的色谱柱，在储存之前，必须用不超过50%有机溶剂的置换溶剂顶替掉原来的流动相，避免盐沉淀。
再用合适的溶剂冲洗色谱柱，尽量冲出残留样品杂质。
最后按照色谱柱说明书保存色谱柱。
