【微信个人秀】QBD在分析方法开发中的应用

在进行分析方法开发之初，按照QbD 的原则， 首先应该确定方法开发的目标。要制定一个清晰可行的分析方法开发目标，要求研究者首先要对目标药品本身有着更深入的认识，熟悉其产品质量概况(Quality TargetProduct Profile，QTPP)。此外，对方法的用途和实际应用的环境也要重点纳入考虑，比如用于研发目的的方法，重在考虑灵敏度、精密度、准确度，而用于生产控制的方法，还要结合实际生产地的设备状况、试剂级别、人员素质情况，考虑方法的耐用性和是否便于转移。

在明确分析方法开发目标之后，即可进入方法筛选过程。一般可首先在掌握文献知识和既有经验等知识的基础上，运用决策树、发散流程图等工具，从样品制备、分离手段、检测手段等几个方面进行考虑，列出所有可能的备选方案。之后，则需要通过预实验和计算机模拟等方法对备选方案进行初步评估，以其对分析方法开发目标的吻合性作为评价指标，对备选方案进行评级，选出具有最佳前景的一种方法进入下一步的风险评估环节。在这一阶段可以选择出2~3 种方法，未进入风险评估环节的方法作为备选方法，在后续环节中如第一方法未能通过，则可回到本环节，选择一种备选方法，重新进行后续流程。

风险评估是QbD 的一个核心理念，在这一环节中，主要是针对从方法筛选环节得到的初步分析方法，从方法的稳健性、耐用性的角度，运用系统性的评估工具(如鱼骨图等)，列出方法中的所有可变因素并进行评估。对于分析方法开发而言，需要从环境、设备、人员、制备、分离、检测等多个角度进行因素分析，根据其中的因素对方法稳健性的影响程度不同，分别评定为高、中、低3 个不同等级。对其中的中等风险因素，有必要制定相应的控制策略，对其中的高风险因素，还需要在下一个环节对其进行进一步的研究，为制定控制策略做好准备。以测定杂质水平的HPLC方法为例，其色谱柱、有机相比例、缓冲液离子强度、pH 值、柱温、进样体积、流速等影响分离的因素可经过风险评估确定为高风险因素。

方法优化与评估的目的是研究高风险因素对方法表现的影响，这主要是采取实验方法来完成的。在传统的分析方法开发中， 常用的是一次改变一个变量(One Variable At a Time，OVAT) 的方法， 而在QbD 理念指导下， 为了更深入的了解变量对效应的影响， 以及评估变量的交互作用， 更常采用实验设计(Design of Experiment，DOE)的方法。仍以测定杂质水平的HPLC 方法为例， 由于高风险因素较多，可以选择分离度和拖尾因子为评价指标，先通过Plackett-Burman 试验进行因素筛选，然后以Box-Behnken 试验设计对方法进行进一步优化以得到结果。  通过这个过程，可以区分出主要因素和次要因素，通过方程建模，可以确定各因素可行的参数范围。

根据以上步骤的研究结果，对方法各变量对方法结果的影响有了科学的认识，对方法的稳健性、耐用性有了较为准确的了解。通过对各个变量在一定范围内的研究，通过已经得到的各因素可行的参数范围，可以拟定出方法的设计空间(操作空间)，在此范围内的对方法进行的微调，无需重新进行验证或申报，给了方法应用较强的灵活性。  结合研究过程中的发现，可以更有针对性的制定系统适用性实验来控制风险，通过制定控制策略，对方法转移、方法重新验证的时机进行了规定，进一步降低了风险。

方法验证是整个分析方法开发的收尾环节。应该按照ICH 相应指导原则、各国药典等的相关规定，按照方法的类别与用途，对开发出的方法进行全面的方法学验证，考察项目包括专属性、线性、精密度、准确度、定量限、耐用性等，验证结果应能满足预先设定的可接受标准，以证明方法可行。