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【正清学术】祛风散寒除湿中药正清风痛宁缓释片对小鼠软骨细胞TGF-β、IL-1β、Fstl-1、TIMP-3表达水平的影响

骨关节炎(osteoarthritis,OA)是一种最常见的关节疾病,以关节疼痛、功能障碍为基本特征。病情进一步发展,可致关节囊挛缩、肌肉萎缩及肢体畸形。


本病以中老年患者多见,其发病率随年龄增长而增加,特别是当今世界人口老龄化,发病率呈逐年上升趋势。本病40岁以下少见,据 X 线普查发现,15~24岁发病率为 10%,55岁以上发病率高达88%,女性多于男性。该病的最终致残率为53%。


OA 属中医学“骨痹”范畴,为虚实夹杂疾病,本病多因正气亏虚感受外邪所致,正如陈念祖《医学从众录》中指出:“是痹不外寒与湿,而寒与湿必假风为帅,寒曰风寒,湿曰风湿,此三气杂合之谈也。”风、寒、湿邪是本病致病的关键因素。


正清风痛宁具有祛风除湿、活血通络、消肿止痛的功效,适用于风寒湿阻证的治疗。其有效成分为中药青风藤中的单体青藤碱(sinomenine,SIN)。《本草汇言》指出 :“青风藤,散风寒湿痹之药也。”本研究选取正清风痛宁缓释片作为祛风散寒除湿法研究载体,通过实时定量PCR实验,从软骨细胞转化生长因子-β(TGF-β)、 白细胞介素-1β(IL-1β) 、卵泡抑素样蛋白-1(Fstl-1)、基质金属蛋白酶组织抑制因子-3(TIMP-3)mRNA表达水平变化,初步探讨祛风散寒除湿法治疗OA的分子机制。


实验材料


实验动物 

SPF 级5~6 d 龄 C57BL/6小鼠乳鼠10只,由天津实验动物中心提供。动物合格证号:SCXK(津)2009-0001。实验动物房室内环境温度20~26 ℃,相对湿度50%。


实验药物 

正清风痛宁缓释片购自湖南正清制药厂,批号0906409。正清风痛宁缓释片水提液由天津中医药大学中医药研究院提供,浓度3 mg·L-1,高压灭菌后,4 ℃冰箱保存备用。


方法


正清风痛宁缓释片为研究载体,通过实时定量 PCR 试验,检测软骨细胞转化生长因子-β、白细胞介素-1β、卵泡抑素样蛋白-1、基质金属蛋白酶组织抑制因子-3 mRNA 表达水平。


结果


正清风痛宁缓释片水提液高、中、低剂量组(以下简称S100、S50、S25组)以及模型对照组软骨细胞都有软骨细胞转化生长因子-β、白细胞介素-1β、卵泡抑素样蛋白-1、基质金属蛋白酶组织抑制因子-3 mRNA 表达。


软骨细胞转化生长因子-β mRNA表达量,S100、S50、S25 组明显高于模型对照组(P < 0.01),而S25 组与模型对照组比较,差异无统计学意义(P > 0.05);白细胞介素 -1β mRNA 表达量S50组明显低于模型对照组,差异有统计学意义(P < 0.01),S100 组与模型对照组比较,差异有统计学意义(P < 0.05);S25 组白细胞介素-1β表达量与模型对照组比较,差异无统计学意义(P > 0.05);卵泡抑素样蛋白-1 mRNA 表达量S100、S50、S25 组均高于模型对照组,但差异无统计学意义(P > 0.05);基质金属蛋白酶组织抑制因子-3 mRNA 表达量,S50、S100 组明显高于模型对照组 (P < 0.01),而S25 组与模型对照组比较,差异无统计学意义(P > 0.05)。


结论


祛风散寒除湿中药正清风痛宁缓释片对关节软骨具有保护作用,其对骨关节炎软骨的保护作用可能是通过上调软骨细胞转化生长因子-β、卵泡抑素样蛋白-1及基质金属蛋白酶组织抑制因子-3 mRNA 在软骨细胞的表达及下调炎性致病因子白细胞介素-1β 的表达来实现的。


内容摘自“吴晶金. 祛风散寒除湿中药正清风痛宁缓释片对小鼠软骨细胞TGF-β、IL-1β、Fstl-1、TIMP-3表达水平的影响.风湿病与关节炎,2014,第3卷第1期.”


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