青春宝抗衰老剂对自然衰老大鼠体内抗氧化能力的影响
(浙江中医药大学动物实验研究中心/比较医学研究中心，杭州 310053)
随着生活和医疗水平的提高, 人类的平均寿命正在逐渐延长, 越来越多的国家已步入老龄化国家。如何使人们在老年时期继续保持良好的生理功能，如何摆脱人口老龄化造成的重大影响, 如何提高老年人的生存质量等问题，越来越受到国内外学者的关注和重视对衰老问题的研究。
众多的研究发现，衰老虽与疾病有一定的关系，但衰老并不是一种疾病，衰老是一个渐进的生理过程。可见，衰老的机理比较复杂，目前普遍认为抗氧化能力的降低、自由基代谢产物的积累是加速衰老的原因之一。
青春宝抗衰老剂是目前国内有较大知名度的抗衰老中成药，由红参、生地黄、天冬、麦冬等多昧药材组成，具有补泻兼备，寓补于泉，秉性中和，调理适度的特点，但对自然衰老动物的抗氧化研究尚未见报道。我们以自然衰老SD大鼠为研究对象，探讨青春宝抗衰老剂的抗氧化的作用机制，为将青春宝抗衰老剂应用于治疗老年性疾病提供客观依据。
[摘要]
目的
探讨青春宝抗衰老剂对自然衰老大鼠体内抗氧化能力的影响。
方法
以健康青年SD大鼠为正常对照组，54只自然衰老SD大鼠分为自然衰老组，青春宝抗衰老剂高、中、低剂量(0.6、0.3、0.15g/kg) 组、六味地黄丸(0.68g/kg)组和维生素 E (50mg/ kg) 组。正常对照组和自然衰老组给予蒸馏水10 mL/kg，其他各组每日灌胃1次，连续给药42d。应用生化方法检测青春宝抗衰老片对自然衰老SD大鼠体内三种脏器(脑、肝、肾)组织匀浆的超氧化物歧化酶(SOD) 、谷胱甘肽过氧化物酶( GSH-px)和丙二醛(MDA)的影响。结果
自然衰老大鼠脑、肝、肾组织匀浆中 SOD、GSH-px活性均显著降低，MDA含量明显升高(P<0.05，P<0.01)；青春宝抗衰老剂可提高衰老大鼠组织匀浆SOD、GSH-px的活性，降低MDA含量，与模型组比较，差异显著(P<0.05，P<0.01)。
结论
青春宝抗衰老剂可以通过有效调节自然衰老大鼠体内的氧化水平，延缓衰老进程。
[关键词] 青春宝抗衰老剂;超氧化物歧化酶;谷胱甘肽过氧化物酶;丙二醛；大鼠
IN VIVO ANTIOXIDANT ACTIVITY OF QINGCHUNBAO IN AGED RATS
(The Research Center of Laboratory Animal Science, Zhejiang Chinese Medical University, Hangzhou 310053, China)
[Abstract] Objective To investigate the effects of Qingchunbao on oxidant level in aged rats.
Methods
Fifty-four natural aging SD rats were randomly divided into 6 groups: natural aging group, low-dose, moderate-dose, high-dose Qingchunbao groups (0.6, 0.3, 0.15g/kg, respectively), LiuWei DiHuang pill (0.68g/kg) group and vitamin E (50mg/ kg) group. Young healthy SD rats were served as normal control group (10mL/kg distilled water) with intragastric administration for 42d. The activities of superoxide dismutase (SOD), glutathione peroxidase (GSH-px) and malondialdehyde (MDA) in brain, liver and kidney in aged rats were detected using biochemical method.
Results
Decreased SOD, GSH-px and increased MDA were observed in aged rats(P<0.05,P<0.01). Administration of Qingchunbao significantly increased the activity of SOD, GSH-px and decreased MDA in the brain, live and kidney tested in aged rats(P<0.05,P<0.01).
Conclusion
Correlated antioxidant activity of the organs in aged rats is in accordance with the normal aging process. The Qingchunbao can be used to compensate the decline in the activities of antioxidant enzymes and thereby to inhibit the aging process.
[Key Words] Qingchunbao; superoxide dismutase; glutathione peroxidase; malondialdehyde; rats
【以下具体实验情况】
1 材料与方法
1. 1 材料
青春宝抗衰老剂浸膏粉，棕褐色粉末，批号：080320，由正大青春宝药业有限公司提供；六味地黄丸(浓缩丸)，批号：7073598，由北京同仁堂科技发展股份有限公司制药厂生产；维生素E胶丸，批号：071101，由杭州华东医药集团新五丰药业有限公司生产。蛋白、超氧化物歧化酶(SOD)、谷胱甘肽过氧化物酶(GS H-px)、丙二醛(MDA)检测试剂盒均购自南京建成生物工程公司。
1.2 实验动物及饲养环境
健康青年雌性SD大鼠(250～280g) 8只和自然衰老SD雌性大鼠(400～460 g) 54 只，由中科院上海实验动物中心/上海斯莱克实验动物有限公司提供，生产许可证[SCXK(沪)2007-0005]，饲养于本中心屏障系统中，温度18~24℃，相对湿度60%~80%，使用许可证[SYXK(浙)2003-0003]。
1.3 仪器 AG204-电子分析天平，瑞士METTLER生产；BT- 815A半自动生化分析仪，上海三科仪器有限公司。
1.4 方法
大鼠在屏障环境下适应性饲养7d后，以健康青年大鼠为正常对照组，将自然衰老大鼠随机分为 6 组(每组9只)：自然衰老模型组，青春宝抗衰老剂高(0.6g/kg青春宝抗衰老剂浸膏粉)、中(0.3g/kg青春宝抗衰老剂浸膏粉)、低(0.15g/kg青春宝抗衰老剂浸膏粉)剂量组、0.68g/kg六味地黄丸组和50mg/ kg维生素E组。正常对照组和模型组给予蒸馏水10mL/kg ；其他各组每日灌胃 1 次，连续给药 42d后，麻醉处死大鼠后，取一定量的脑、肝、肾组织，冷PBS冲洗拭干后称其重量并剪碎，加入预冷生理盐水，用组织匀浆机制备10%的脑、肝、肾组织匀浆，4000r/min离心10min后，取上清液测定蛋白含量后进行抗氧化指标测定。
1.5 检测方法及指标
SOD活力测定采用黄嘌呤氧化酶法，GSH-px水平测定采用DTNB比色法，MDA采用TBA比色法。严格按照配套操作说明书进行。
1.6 统计学处理
所有计量数据均均数±标准差(`x ±s)表示，用SPSS11.0统计软件包进行单因素方差分析和q检验。
2 结果
2.1 青春宝抗衰老剂对自然衰老大鼠脑组织中 SOD、GSH-px 活性和 MDA含量的影响
自然衰老大鼠脑组织中SOD、GSH-px活性明显低于青年对照组(P<0.05，P<0.01)，且MDA含量显著高于青年对照组(P<0.05)；青春宝抗衰老剂组、六味地黄丸组和VE组均能显著升高脑组织中SOD和GSH-px活性(P<0.05，P<0.01)，青春宝抗衰老剂高剂量组和VE组能显著降低MDA含量(P<0.05)。结果见表1。
表1 青春宝抗衰老剂对自然衰老大鼠脑组织中SOD、GSH-px 活性和 MDA的影响(`x ±s)
注：自然衰老组与青年对照组比较，△P<0.05，△△P<0.01;自然衰老组与给药组比较，*P<0.05，**P<0.01.
2.2 青春宝抗衰老剂对自然衰老大鼠肝、肾组织中SOD活性和MDA含量的影响
自然衰老大鼠肝、肾组织中SOD活性明显低于青年对照组(P<0.05)，且MDA含量显著高于青年对照组(P<0.05)；青春宝抗衰老剂高剂量组能显著升高肝、肾组织中SOD活性和降低MDA含量(P<0.05，P<0.01)，中剂量组和六味地黄丸组能显著升高肝组织中的SOD活性和降低肝、肾组织中的MDA含量(P<0.05，P<0.01)，低剂量组能显著升高肝组织中SOD活性(P<0.05)；VE组能显著升高肝组织中SOD活性和降低肾组织中MDA含量(P<0.05)。结果见表2。
表2青春宝抗衰老剂对自然衰老大鼠肝、肾组织中SOD 活性和MDA的影响(`x ±s)
注：自然衰老组与青年对照组比较，△P<0.05，△△P<0.01;自然衰老组与给药组比较，*P<0.05，**P<0.01.
3 讨 论
自由基是机体正常代谢的产物。正常情况下自由基不断产生并不断被清除，但随着年龄增长和疾病干扰，生物体内自由基水平升高，它可对细胞膜、细胞微细结构造成不可逆的损伤和破坏，致使机体防御能力减弱，促发各种疾病，加速衰老[1]。人体内存在着清除自由基和抑制自由基反应的防御系统，其中主要包括酶类及非酶类抗氧化剂。前者主要有SOD、GSH-px、CAT等。非酶类抗氧化剂就是人们补充的外源性抗氧化剂。在老年人，体内自由基产量增加但清除自由基的各种机制却相对退化，加强其自由基清除能力，在抗衰老方面有重要意义[2]。动物实验证明，寿命的长短和自由基的产生以及人体内抗氧化剂浓度有密切的关系。本研究以自然衰老大鼠为模型，结果显示衰老大鼠体内脑、肝、肾组织的抗氧化能力明显降低，说明衰老可以导致体内自由基代谢的异常。
SOD，GSH-Px是体内两种十分重要的抗氧化酶，是机体抗氧化防御系统的重要成员。其中SOD对红细胞的氧化与抗氧化平衡起着至关重要的作用，SOD能清除超氧阴离子自由基，保护红细胞免受损伤，它是体内主要的自由基清除酶。SOD活力的高低可间接反映红细胞清除氧自由基的能力。GSH-Px是生物体内广泛存在的一种重要的清除H2O2和许多有机氢过氧化物的酶。它能催化H2O2和脂质过氧化物还原，防止脂质过氧化物对机体生物膜和组织的损伤，并防止脂质过氧化物进一步水解为有害物质丙二醛(MDA)。它是一种保护性酶，在肝脏和红细胞中最多[3]。GSH-Px活性部位含Se。近来有研究发现，GSH-Px本身也能被过氧化反应或自由基损伤。MDA是脂质过氧化反应链式终止阶段产生的小分子产物，脂质过氧化物形成环状内过氧化物可断裂形成烯醛、丙二醛，其含量可以间接反映自由基的产生情况和机体组织细胞的脂质过氧化程度[4] 。SOD、GSH-px活性及 MDA 水平间接反映了机体清除氧自由基的能力和细胞受自由基攻击的严重程度。近年来的研究表明，自由基对机体的影响是复杂的，为减少自由基对机体的损害，人类常常用人工合成的各种抗氧化剂来保护自己，目前临床上常用维生素 E、维生素 C、褪黑素、微量元素硒等药物预防和治疗衰老相关疾病，它们的作用大多单一，不能全面改善机体的衰老状态[5-7]。本研究观察了青春宝抗衰老剂对自然衰老大鼠脑、肝、肾组织抗氧化系统的影响，结果表明，青春宝抗衰老剂可提高SOD、GSH-px活性，降低MDA含量，提示青春宝抗衰老剂能抑制自由基的产生，提高组织细胞的抗氧化活性，由此说明青春宝抗衰老剂可以清除体内自由基、抗氧化和延缓衰老。另外，青春宝抗衰老剂在不同组织中所起作用的差异，可能与其在组织中的代谢有关，确切机制尚需进一步探讨。
[参考文献]
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